期刊简介
1974年创刊，中华人民共和国卫生部主管，中华医学会、浙江省医学科学院主办。本刊是公开发行的国家级医学学术期刊，中国科技论文统计源期刊、中国科技核心期刊，国家首批允许刊登处方药广告的重点专业媒体。杂志栏目设有决策参考、专家论坛、论著、短篇论著、临床经验、病例报道、实验研究、综述、讲座及国际会议动态等。
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首页>国际流行病学传染病学杂志
- 杂志名称：国际流行病学传染病学杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华医学会,浙江省医学科学院
- 国际刊号：1673-4149
- 国内刊号：33-1340/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：1996年获卫生部颁发的《国外医学》系列期刊编辑质量一等奖期刊收录：万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中)
HIV-1 p24基因的克隆构建及对中国仓鼠卵巢细胞毒性的初步研究
陈亮；吴南屏；姚航平
关键词：HIV-1, P24蛋白, 基因表达
摘要：目的 在大肠埃希菌(E.coli)及中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达HIV-1 P24抗原,并在体外观察P24蛋白对CHO细胞的毒性作用.方法 利用RT-PCR技术扩增从HIV-1感染者外周血中提取的p24抗原基因,p24基因经HindⅢ、EcoR Ⅰ酶切后插入pEGFP-C2,转染CHO细胞,观察绿荧光蛋白的表达.同时p24基因经HindⅢXhoⅠ酶切后插入表达载体pET24a,转化E.coli BL21 (DE3),经WTG诱导,表达P24抗原.运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳检测插入基因片段的正确性,并用免疫印迹法及ELISA法对表达产物的纯度和抗原性进行检测.提纯重组蛋白P24,加入CHO细胞培养液中,观察其对CHO细胞的毒性作用.结果 转染CHO细胞2h绿色荧光蛋白表达高,培养上清P24蛋白浓度15 ng/L.随时间延长绿荧光逐渐减少,8h后荧光消失,细胞全部死亡.在E.coli BL21中p24基因可获高效表达.在CHO细胞培养液中加入重组蛋白P24,细胞逐渐死亡.结论 构建了HIV-1 p24表达载体pEGFP-C2-p24,在CHO细胞中能瞬时表达.构建了HIV-1 p24表达载体pET24a-p24,在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的抗原性.重组蛋白P24在体外对CHO细胞具有毒性,可能参与了HIV-1的致病机制.
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